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操作方法:
1.取無菌肝素抗凝血0.lml,加入1.8ml細胞培養(yǎng)液中,同時加入1000μg/m1PHA0.1m1,對照管不加PHA,將細胞置37℃、5%CO2培養(yǎng)3d,每天搖動1次。
2.培養(yǎng)結(jié)束時吸棄大部分上清液,加入8.5g/LNH4Cl4ml混勻,置37℃水浴10min。
3.2500r/min離心10min,棄上清液,沉淀加5ml固定液,室溫作用5min。
4.2500r/min離心10min,棄上清液,留0.2ml沉淀細胞制片,迅速吹干。
5.吉姆薩染液染色10~20min,水洗,干燥。
6.油鏡計數(shù)200個淋巴細胞中轉(zhuǎn)化的細胞數(shù),計算轉(zhuǎn)化率。
結(jié)果判斷:
1.淋巴母細胞的形態(tài)學(xué)標準細胞核的大小、核與胞漿的比例、胞漿染色性及核的構(gòu)造與核仁的有無。
⑴成熟的小淋巴細胞:與未經(jīng)培養(yǎng)的小淋巴細胞大小一樣,為6~8μm,核染色致密,無核仁,核與胞漿比例大,胞漿染色為輕度嗜堿性。
⑵過渡型淋巴細胞:比小淋巴細胞大,約10~20μm,核染色致密,但出現(xiàn)核仁,此為與成熟小淋巴細胞鑒別要點。
⑶淋巴母細胞:細胞體積增大,約20~30μm,形態(tài)不整齊,常有小突出,核變大,核質(zhì)染色疏松,有核仁1~2個,胞漿變寬,常出現(xiàn)胞漿空泡。
⑷其它細胞:如中性粒細胞在培養(yǎng)72h后,絕大部分衰變或死亡呈碎片。
2.淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的計算按上述分類檢查推片頭、體、尾三部分,計數(shù)200個淋巴細胞,算出百分率。轉(zhuǎn)化的淋巴細胞包括淋巴母細胞和過渡型淋巴細胞,未轉(zhuǎn)化的淋巴細胞指的是成熟的小淋巴細胞。在正常情況下,PHA誘導(dǎo)的淋巴細胞轉(zhuǎn)化率為60~80%,如為50~60%則偏低,50%以下則為降低。
再根據(jù)結(jié)果得出正確的判斷。
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